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检测细胞凋亡

一、形态学观察方法 1、HE染色、光镜观察:凋亡细胞呈圆形,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状,细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙(AO)染色,荧光显微镜观察:活细胞核呈黄绿色荧光,胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内...

一、原理 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通...

1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测...

除了上述的操作步骤,还有一个必须注意的,就是对照。阴性对照,阳性对照,还有调节通道的,只加PI,只加AV,这些都要设计好,要不测出来的值不可信。 细胞接种后,每日计数细胞数,连续观察7-10日,在对数坐标纸上绘制细胞生长曲线,确定曲线基...

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit)是用FITC标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。 其检测原理为:在正常的活细胞中...

DNA ladder法就是凝胶电泳DNA片段测定法 DNA Ladder 法检测细胞凋亡方法如下: 1、凋亡处理:细胞经凋亡处理后,收集细胞(包括悬浮细胞),用70%乙醇-20度固定2h。 2、裂解细胞: 加400ml细胞裂解液,充分摇匀后再加蛋白酶K(10mg/ml),置65度...

实验方法 Hoechst-PI染色法检测细胞凋亡 亚“G1 ”峰方法简便,但只是代表G0 /G1 期发生凋亡的细胞,S期和G2 期细胞凋亡发生于G1 峰后,无法观察。此外,由于全部细胞均经固定,因此不能区别死细胞和活细胞。Hoechst-PI染色则可弥补上述不足。Hoec...

形态学观察方法: 1、HE染色、光镜观察:凋亡细胞呈圆形,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状,细胞表面有“出芽”现象. 2、丫啶橙(AO)染色,荧光显微镜观察:活细胞核呈黄绿色荧光,胞质呈红色荧光.凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧,可见细胞...

1.收集细胞{数目约(1~5)×10 6个/mL},500 1000 r/min离心5min ,弃去培养液. 2.3mlPBS洗涤1次. 3.离心去PBS,加入冰预冷的70% 的乙醇固定,4℃,1—2小时. 4.离心弃去固定液,3mlPBS重悬5 min. 5.400目的筛网过滤1次,500—10 00r/min离心5min,弃去PBS...

有几个可能性: 染色特异性差,这个最常见于PI+anexin V 双染的情况。其实没有方法可以特异性的染坏死细胞,就认为PI阳性的是,其实只要细胞膜通透性增高,就会PI阳性,没有特异性。另外anexin V阳性也不一定就是凋亡早期,任何干扰膜稳定性的操...

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